PRESENTACION ELECTROFORESIS

Published on
Scene 1 (0s)

[Audio] Electroforesis DRA. BLANCA GLADIANA BELTRÁN PIÑA 10- 11- 2020 01

Electroforesis

DRA. BLANCA GLADIANA BELTRÁN PIÑA

10-11-2020

01

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA

Scene 2 (16s)

[Audio] Técnica analítica ampliamente utilizada para el análisis de ácidos nucleicos y proteínas. •El procedimiento sistemático incluye una etapa de separación, purificación y preparación de las muestras. •La mayoría de las bio- moléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran, así pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula. 01

Técnica analítica ampliamente utilizada para el análisis de ácidos nucleicos y proteínas.

•El procedimiento sistemático incluye una etapa de separación, purificación y preparación de las muestras.

•La mayoría de las bio-moléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran, así pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula.

01

Scene 3 (52s)

[Audio] 02 Fundamento Químico El principio de la electroforesis consiste en la migración proporcional de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o tamaño; movimiento generado por el campo eléctrico.

02

Fundamento Químico

Scene 4 (1m 16s)

[Audio] 03 • Cámara de electroforesis • Peine para pocillos • Gel • Detector • Fuente de poder Instrumentación

03

Instrumentación

Scene 5 (1m 35s)

[Audio] Electroforesis en gel de poliacriamida ( PAGE) 04 •La separación electroforética de proteínas se realiza en gel de poliacrilamida (PAGE). Las proteínas son impulsadas por una corriente que se aplica a través de una matriz gelatinosa •La matriz se compone de polímeros de una pequeña molécula orgánica ( acrilamida) que establece enlaces cruzados para formar un tamiz molecular.

Electroforesis

en gel de poliacriamida

(PAGE)

04

•La separación electroforética de proteínas se realiza en gel de poliacrilamida (PAGE).

Las proteínas son impulsadas por una corriente que se aplica a través de una matriz gelatinosa

•La matriz se compone de polímeros de una pequeña molécula orgánica (acrilamida) que establece enlaces cruzados para formar un tamiz molecular.

Scene 6 (2m 13s)

[Audio] Una vez que el gel polimeriza, la losa (o tuvo de poliacrilamida) se suspende entre dos compartimientos que contienen un amortiguador en el que se sumergen electrodos opuestos. 05

05

Scene 8 (3m 14s)

[Audio] 07 Entonces se pueden revelar mediante la adición de un colorante específico para hacerlas visibles. Se emplean compuestos como el bromuro de etidio, para los ácidos nucleicos, o la plata, para las proteínas. Si el reactivo es fluorescente bajo la luz UV, se puede simplemente hacer una fotografía de la placa bajo dicha luz. Si se han inyectado varias mezclas una junto a otra en la placa, se producirán separaciones paralelas. Cada separación mostrará distintas bandas correspondientes a cada componente de la mezcla. Revelado y visualización

07

Entonces se pueden revelar mediante la adición de un colorante específico para hacerlas visibles.

Se emplean compuestos como el bromuro de etidio, para los ácidos nucleicos, o la plata, para las proteínas.

Si el reactivo es fluorescente bajo la luz UV, se puede simplemente hacer una fotografía de la placa bajo dicha luz.

Si se han inyectado varias mezclas una junto a otra en la placa, se producirán separaciones paralelas. Cada separación mostrará distintas bandas correspondientes a cada componente de la mezcla.

Revelado y visualización

Scene 9 (4m 3s)

[Audio] 08 El progreso de la electroforesis se sigue al observar la migración de un tinte rastreador cargado que se mueve justo por delante de las proteínas más rápidas. Después, de que el tinte rastreador se mueve a la posición deseada, la corriente se corta y el gel se retira de su recipiente. Por lo general el gel se tiñe de color azul Coomassie o tinción de plata para revelar la localización de las proteínas. Utiliza detectores de alta sensibilidad como en la cromatografía de líquidos de alta resolución ( HPLC) y el uso de capilares de sílice fundida ( SiO2), como en la cromatografía de gases ( GC) Revelado y visualización

08

El progreso de la electroforesis se sigue al observar la migración de un tinte rastreador cargado que se mueve justo por delante de las proteínas más rápidas.

Después, de que el tinte rastreador se mueve a la posición deseada, la corriente se corta y el gel se retira de su recipiente.

Por lo general el gel se tiñe de color azul Coomassie o tinción de plata para revelar la localización de las proteínas.

Utiliza detectores de alta sensibilidad como en la cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) y el uso de capilares de sílice fundida (SiO2), como en la cromatografía de gases (GC)

Revelado y visualización

Scene 10 (4m 55s)

[Audio] Si las separaciones son incompletas, se dará un solapamiento entre bandas haciendo indistinguibles dos o más componentes. Existen marcadores especiales que contienen una mezcla de moléculas de tamaño conocido. La distancia a la que se encuentra la banda del principio es (aproximadamente) inversamente proporcional al logaritmo del tamaño de la molécula. 09

Si las separaciones son incompletas, se dará un solapamiento entre bandas haciendo indistinguibles dos o más componentes.

Existen marcadores especiales que contienen una mezcla de moléculas de tamaño conocido.

La distancia a la que se encuentra la banda del principio es (aproximadamente) inversamente proporcional al logaritmo del tamaño de la molécula.

09

Fragmentos de ADN tehidos en bromuro de etidio tras una electroforesis en un gel de agarosa

Scene 11 (5m 27s)

[Audio] Factores que afectan una electroforesis 10 Densidad de carga ( carga por unidad de masa), mientras mayor sea la densidad de carga, la proteína se impulsa con más fuerza por el gel y la migración es más rápida. El tamaño y forma de la proteína, si la proteína es muy grande se puede llegar a enredad en el tamiz de la poliacrilamida y la migración es más lenta. La concentración de acrilamida, a menor concentraciónción menos enlaces cruzados se formaran en el gel y la migración de una molécula proteica determinada puede ser más rápida ( 5%, 60- 250 KdDa; 15%, 10- 50kDa).

Factores que afectan una electroforesis

10

Densidad de carga (carga por unidad de masa), mientras mayor sea la densidad de carga, la proteína se impulsa con más fuerza por el gel y la migración es más rápida.

El tamaño y forma de la proteína, si la proteína es muy grande se puede llegar a enredad en el tamiz de la poliacrilamida y la migración es más lenta.

La concentración de acrilamida, a menor concentraciónción menos enlaces cruzados se formaran en el gel y la migración de una molécula proteica determinada puede ser más rápida ( 5%, 60-250 KdDa; 15%, 10-50kDa).

Scene 12 (6m 18s)

[Audio] Determinación de proteínas en el área de alimentos. Análisis y seguimiento del grado de maduración de quesos. Análisis de productos procesados, en los se pueden producir cambios en la conformación de las proteínas y hasta proteolisis. Aplicaciones en los alimentos y en la Nutrición Humana 11

Determinación de proteínas en el área de alimentos.

Análisis y seguimiento del grado de maduración de quesos.

Análisis de productos procesados, en los se pueden producir cambios en la conformación de las proteínas y hasta proteolisis.

Aplicaciones en los alimentos y en la Nutrición Humana

11

Scene 13 (6m 45s)

[Audio] Propiedades nutricionales y sensoriales de los productos derivados de la leche, la carne o los cereales, que dependen de su contenido en proteínas Análisis de muestras que han sido sometidas a algunos procesos de degradación y de contaminación biológica, lo que afecta a la composición proteica de los alimentos. Investigación en Nutrigenómica. Aplicaciones en los alimentos y en la Nutrición Humana 12

Propiedades nutricionales y sensoriales de los productos derivados de la leche, la carne o los cereales, que dependen de su contenido en proteínas

Análisis de muestras que han sido sometidas a algunos procesos de degradación y de contaminación biológica, lo que afecta a la composición proteica de los alimentos.

Investigación en Nutrigenómica.

Aplicaciones en los alimentos y en la Nutrición Humana

12

Scene 14 (7m 20s)

Referencias

Chopin,M. Principios básicos de electroforesis capilar:técnica analítica de separación de analitos. Tecnollogía en Salud. 2012:2(1):86-89.

Experimentos de biología molecular (1): electroforesis. (2008). Disponible en: https://oldearth.wordpress.com/2008/10/16/experimentos-de-biologia-molecular-1-electroforesis/

Fierro, F. (2020). Electroforesis de ADN. Disponible en: www.publicaciones.inecc.Gob.mxg