Imunidade Inata

Imunidade Inata. Casos clínicos Método: PBL.

Caso clínico – 1. Uma menina de 13 anos furou as orelhas para colocação de brincos. Embora tenha sido instruída a limpar a área em redor dos brincos com álcool, não o fez nos primeiros 2 dias por esquecimento. No terceiro dia, apercebeu-se que a área em torno de um lóbulo da orelha estava vermelha e ligeiramente inchada. a) Que ramo do sistema imunológico é provavelmente responsável pelos sintomas descritos? b) Que tipo de células seriam provavelmente encontradas no tecido se fosse realizada uma biópsia? Porque? c) Distinga inflamação de infeção.

Respostas. a. Como o inchaço surgiu num prazo de 2 dias, é provavelmente causada por uma resposta imune inata. A resposta imune adaptativa leva mais tempo para se desenvolver porque depende do reconhecimento de um antigénio específico pelos linfócitos. Edema e rubor nos tecidos são causados por neutrófilos deixando a corrente sanguínea por meio de diapedese em resposta à presença de bactérias..

Respostas. b. Pode haver macrófagos , neutrófilos e células dendríticas presentes, mas como é recente o predomínio é de neutrófilos.

Inflamação. c. É a resposta do hospedeiro a estímulos inflamatórios de diversa natureza: Infeciosos Químicos Físicos, como trauma ou exposição à radiação Caracteriza-se pelas manifestações cardinais de Celso: calor, rubor (eritema), tumor (edema) e dor (nas articulações – impotência funcional) Tipos: Aguda/simples : resolve-se com a remoção do estimulo inflamatório e repara os tecidos. Predomínio de neutrófilos . Ocorre rapidamente, antes da imunidade adaptativa Cronica : prolongada, mantem-se mesmo apos remoção do estimulo. Causa lesão tecidular e perda da função. Predomínio de macrófagos, células dendríticas e linfócitos (células mononucleares).

Inflamação. 1. libertação de mediadores como a histamina pelos mastócitos e C5a que causam vasodilatação. Resultado aumento do fluxo sanguíneo – rubor e calor 2. aumento da permeabilidade vascular (por contração das células endoteliais) - ↑ liquido espaço intersticial: edema e dor 3. migração dos leucócitos, sb neutrófilos dos capilares para os tecidos por DIAPEDESE, em resposta às PFA, quimiocinas e citocinas . Os neutrófilos são mobilizados em 30-60 min e pode durar 24-48h 4. migração de macrófagos e células dendríticas 5. as PFA+ estimulam a fagocitose pelo macrófagos, neutrófilos e células dendríticas.

Leukocyte Extravasation Tight binding state int"rin cytokines (eg„ TNF and o Blood vessel lumen Interstitium @ Lineage Higwaffinity 1 Chem'kines 000 0 000 0 Diapedesis and Migration PEC AM-I Moises Dominguez.

Fagocitose. Etapas 1. contacto entre o leucócito e célula estranha 2. emissão de pseudópodes 3. formação do fagossoma 4. fusão dos lisossomas com os fagossomas 5. formação do fagolisossoma 6. digestão dos microrganismos pelas enzimas hidrolíticas dos lisossomas ( lisozima, mieloperoxidase , e outras enzimas proteolíticas) 7. Libertação dos resíduos para o espaço extracelular por exocitose Processos de eliminação: Via O2-dependente Via O2-independente.

Fagocitose – vias. Via O2 – dependente Formação de radicais livres de O2 Via O2-independente Ativação de defensinas e catepsina G.

Neutrófilo. Ou PMN neutrófilo Adultos: 50-70% leucócitos periféricos Núcleo com 2 a 5 lobos (segmentado) Principal função: fagocitose e NETosis Muitos grânulos (200/células) – que sofrem desgranulação na fagocitose.

Neutrófilo. Sofrem autólise durante a sua atividade – células Kamikaze ½ dos neutrófilos do sangue estão próximos das paredes dos vasos – pool marginal (a outra ½ circula no sangue por 1-2d – pool circulante). Essa marginação permite a diapedese (movimento através da parede dos vasos) e ocorre por fatores quimiotacicos (quimiotaxia) Neutrofilia – aumento dos neutrófilos do sangue – causas (infeção sistémica ou local grave): Desvio do pool marginal para o circulante Aumento do fluxo de neutrófilos da medula óssea Aumento da produção pela medula óssea- leucemia Neutropenia – diminuição dos neutrófilos do sangue – causas: Quimioterapia Radioterapia Aplasia medular HIV LES, etc.

Neutrófilos: fagocitose. azurophilic Fc receptor lysosome antibody pseudopod residual digestion exocytosis.

Monócitos. As maiores células do sangue periférico 2-10% leucócitos periféricos. Circulam por 30h e migram para os tecidos e tornam-se macrófagos Núcleo irregular em forma de ferradura que ocupa quase ½ da célula O citoplasma abundante cora de cinzenta e tem aspeto de vidro fosco pela presença de grânulos “ dustlike ” que são de 2 tipos: Uns contêm: peroxidase, fosfatase acida, arilsulfatase (semelhantes aos lisossomas dos neutrófilos) Outros contêm: β- glucuronidase , lisozima, lípase Macrófagos Todos derivam dos monócitos. No tecidos sofrem diferenciação e dividem-se. Semi-vida : meses Na sua transição ficam maiores mas perdem a peroxidase. Menor capacidade na fagocitose que os neutrófilos porque se movem lentamente Papel na imunidade: Inata: fagocitose, destruição microbiana (ficam ativados no contacto com agentes patogénicos e quando são estimulados pelas citocinas produzidas pelos linfócitos T), atividade anti-tumoral , erradicação de patógenos intracelulares e secreção de mediadores Adaptava: são APC (Células Apresentadoras de Ag ) – apresentam Ag fagocitados aos linfócitos T Têm designações diferentes consoante os tecidos que ocupam.

A opsonina – PCR. Assim designada por ter sido identificada a sua ligação ao polissacárido C do pneumococos ( Tillet e Francis- 1930) Atualmente é reconhecida como tendo um papel mais abrangente: PM 118 000-144 000 daltons ; pentamerica (da família das pentraxinas ) Atua de forma ≈ Ac , como opsonina: Reconhece a fosfocolina (principal substrato), peptidoglicanos , proteínas ribonucleares e carbohidratos nas bactérias, fungos e parasitas (e algumas células mortas) Considerado uma forma primitiva da Ac não especifico Semivida: 18h; eleva-se rapidamente, por vezes 100x-1000x em 4-6h apos infeção, cirurgia, ou outras formas de trauma; pico em 48h, diminui rapidamente quando cessa o estimulo inflamatório – mais útil indicador da inflamação aguda Participa na aglutinação, precipitação e ativação do complemento (via clássica) Reconhecida pelos recetores específicos dos monócitos/macrófagos e neutrófilos, promove a FAGOCITOSE.

c) Distinga inflamação de infeção. Inflamação ≠ Infeção Inflamação – resposta do hospedeiro a vários estímulos (químicos, infeciosas e físicos), assim sendo a infeção é apenas uma causa de inflamação.

Caso clínico – 2. Uma estudante universitária de 20 anos foi à urgência com sintomas de mal-estar, fadiga, dor de garganta e febre ligeira. Um hemograma completo foi realizado e tanto a contagem de eritrócitos quanto de leucócitos estavam dentro dos limites normais. Uma contagem normal de leucócitos descartou a possibilidade de uma infeção bacteriana. Foi realizado um teste rápido para pesquisa de Streptococcus pyogenes na orofaringe, que foi negativo. Um teste de aglutinação em lâmina para mononucleose infeciosa foi indeterminado (nem positivo ou negativo), enquanto um teste de aglutinação em lâmina para a PCR foi positivo. Os resultados de uma determinação semi-quantitativa de PCR indicaram um nível aumentado de aproximadamente 20 mg/ dL . A estudante foi instruída a regressar alguns dias depois para repetir o teste Monospot . a) Que situações podem induzir um aumento da PCR? Qual a sua função? b) Um aumento da PCR seria consistente com a possibilidade de mononucleose infeciosa? c) Que outras proteínas de fase aguda conhece? Como as pode classificar? d) Como faz o doseamento da PCR e) O que é e para que serve o teste Monospot.

Respostas. a. A PCR é um dos primeiros indicadores de uma possível infeção. Os níveis também aumentam em caso de neoplasia maligna, ataque cardíaco ou traumatismos no corpo. Se a infeção tem origem bacteriana, é expectável que ocorra um aumento no número de glóbulos brancos. Este aumento ocorre principalmente pelo recrutamento de neutrófilos para ajudar a combater o organismo invasor. No entanto, se a infeção é causada por um vírus, normalmente não há aumento na contagem de neutrofilos (pode haver aumento do número de linfócitos – linfocitose, com linfócitos atípicos (>20% linfócitos) Sendo uma proteína de fase aguda, os níveis de PCR aumentam significativamente num intervalo de 24 horas, muito antes que qualquer anticorpo específico possa ser detetado. b. Um aumento da PCR provavelmente seria observado se a estudante apresentasse infeção por EBV (mononucleose infeciosa), uma infeção viral. No entanto, a PCR não indica especificamente que tipo de infeção viral ou bacteriana pode estar presente. Os sintomas são compatíveis com a possibilidade de mononucleose, mas outras patologias não podem ser descartadas. Repetir o teste monospot após alguns dias permitirá tempo suficiente para que um nível detetável de anticorpos se forme e o diagnóstico possa ser confirmado..

Qual a função da PCR?. Estrutura pentamerica – 5 subunidades É opsonina – liga-se à fosfocolina na membrana dos microrganismos e a recetores específicos dos monócitos/macrófagos e neutrófilos ( fagocitos ) Ativa o complemento – via clássica.

C) que outras proteínas de fase aguda conhece?. Table 3-2 PROTEIN Characteristics of Acute-Phase Reactants C-reactive protein Serum amyloid A Alpharantitrypsin Fibrinogen Haptoglobin Ceruloplasmin Complement C3 RESPONSE TIME (HR) 24 24 24 24 48—72 48—72 NORMAL CONCENTRATION (MG/DL) 0.5 5 200-400 200-400 40-290 20-40 60—140 INCREASE 1 ooox 1 ooox 2-rox 2-5x 2-10X FUNCTION Opsonization, complement activation Activates monocytes and macrophages Protease inhibitor Clot formation Binds hemoglobin Binds copper and oxidizes iron Opsonization, lysis.

c)Como as pode classificar?. Proteínas sérias associadas ao inicio de qualquer infeção ou lesão tecidular Podem aumentar (+) ou diminuir (-) (estas PFA -: albumina, transferrina , Pre -albumina e RBP) Podem ser: pro-inflamatória: PCR , MBL, Proteína surfactante A(SP-A) e D (SP-D); L-, H- e M- Ficolinas ; C3a, C4a, C5a, etc anti-inflamatória: Amiloide Serica A (SAA); α 2-Macroglobulina; α 1-anti-tripsina, ceruloplasmina , fibrinogénio, haptoglobina Geralmente produzidas no fígado.

Patogenia da infeção EBV. Infeção inicial pelo EBV – orofaringe – infecta Células epiteliais - o EBV liga-se a β 1 integrinas na sua superfície Linfócitos B – o EBV liga-se ao CD 21 – estes linfócitos ativam-se de forma policlonal produzindo ac heterofilos Assintomática - Crianças Quadro de MI – adolescentes e adultos (tríade: febre, linfadenopatia e odinofagia - 2-4 semanas) mas fadiga, mialgias podem persistir por meses Tratamento: sintomático ( NÃO antibióticos ! É viral) Se tratado com amoxicilina.

d) como faz o doseamento da PCR. https://youtu.be/zDyETxcAO0Y.

Aglutinaqäo indireta e indirecta reversa (B) Aglutinacäo indireta (ou passiva) Aglutinacäo indireta (ou passiva) reversa Carrier particles Coated mixed wih partdes sample soluble antgen Agglutination Carrier particbs Coated mixed with particles reagent antibody Patient sample Aggutination FIGURE 10-12 Passive and reverse passive agglutination. (A) Passive agglutination. Antigen is attached to the carrier particle; agglutination occurs if patient antibody is present. (B) Reverse passive agglutination. Antibody is attached to the carrier particle; agglutination occurs if patient antigen is present..

Resumo - reacöes de aglutinaqäo Study Guide: Comparison of Agglutination Reactions TYPE OF REACTION Direct agglutination Indirect (passive) agglutination Reverse passive Agglutination inhibition Hemagglutination inhibition PRINCIPLE Patient serum is reacted with antigen that is naturally found on a particle. Patient sample is reacted with particles coated with antigens not normally found on their surfaces. Patient sample is reacted with particles that are coated with reagent antibody. Haptens are attached to carrier particles. Particles compete with patient antigens for a limited number of antibody sites. RBCs spontaneously agglutinate if viral particles are present. RESULTS Agglutination indicates the presence of patient antibody to a natural antigen. Agglutination indicates the presence of patient antibody to an artificially attached antigen. Agglutination indicates the presence of specific antigen in the patient sample. Lack of agglutination is a positive test, indicating the presence of antigen in the patient sample. Lack of agglutination is a positive test, indicating the presence of patient antibody..

e) O que é e para que serve o teste Monospot. Anticorpos heterófilos – ac capazes de reagir com Ag semelhantes de ≥ 2 espécies Os ac heterofilos ( ≠ dos ac específicos) da Mononucleose Infeciosa (MI) são IgM produzidos na ativação policlonal B e são capazes de reagir com GV de cavalo, ovelha e gado bovino Presentes em 40% dos pacientes com MI – 1ª semana de doença Presentes em 80-90% dos pacientes com MI- 3ª semana de doença Geralmente desaparecem nos 3 meses apos o inicio da infeção F -: 10 % adultos e 50% < 4 anos F+: linfoma, hepatite viral, malaria, doenças autoimunes (não são tão sensíveis e específicos como os anticorpos específicos) Como surgem na fase aguda da infeção – rastreio para pacientes suspeitos de MI.

e) O que é e para que serve o teste Monospot. Teste monospot Teste de deteção de ac heterofilos realizada em lamina Técnica de aglutinação DIRECTA A mistura do soro com ag do rim do porquinho da India mantinham a capacidade de aglutinar GV do cavalo A mistura do soro com GV bovinos perde capacidade de aglutinar GV de cavalo ( porque os ac heterofilos ligavam-se aos GV de bovinos) (permite distinguir os ac heterofilos da MI de outros ac heterofilos produzidos por outras doenças) Atualmente estes métodos foram substituídos por testes mais sensíveis: Aglutinação Imunocromatografia (https://youtu.be/bXNh104_WQg) que utilizam estratos purificados de GV bovinos.

Curiosidades…. FIGURE 23—7 Atypical lymphocytes from a patient with infectious mononucleosis. Note the variation in size, nuclear:cytoplasmic ratio, and chromatin (From Harmening D. Clinical Hematology and Fundamentals of Hemostasis. 5th ed. Philadelphia, PA F. A. Davis; 2009).

Linfoma de Burkitt. O linfoma de Burkitt é um linfoma não Hodgkin agressivo de células B que ocorre em crianças e adultos. Existem: formas endêmicas (africana) costuma se manifestar como aumento da mandíbula ou dos ossos da face. esporádicas (não africana) tumor abdominal relacionadas com a imunodeficiência..

Leucoplasia pilosa. A leucoplasia pilosa oral é uma manifestação precoce da infeção VIH em adultos. As placas brancas no bordo da língua e ocasionalmente na mucosa oral contem DNA do EBV..

Caso clínico - 3. Um homem de 45 anos foi ao médico para realizar um check-up anual. Embora estivesse um pouco acima do peso, os resultados laboratoriais indicaram que tanto o colesterol total como o colesterol HDL estavam dentro dos limites normais. Os níveis de fibrinogénio no plasma são de 450 mg/ dL (Valor normal 150-370 ) e o doseamento de PCR é 3,5 mg/ dL (Valor normal< 1mg / dL ). O exame físico é perfeitamente normal. O médico advertiu o utente que ele pode estar em risco de sofrer um futuro ataque cardíaco e aconselhou-o a realizar exercício físico regulamente, associado a uma alimentação e dieta saudável, com baixo teor de gordura. No entanto, a esposa do utente disse-lhe que se apresentasse níveis de colesterol normais ele não tinha nada com que se preocupar a) Quem está correto? Explique a sua resposta. b) Porque o fibrinogénio encontra-se também elevado ? c) Comente a frase – A aterosclerose é uma condição inflamatória d) Na determinação desta PCR de alta sensibilidade, qual o método utilizado?.

Resposta. Embora os níveis de colesterol estivessem dentro dos limites normais para HDL e colesterol total, vários estudos recentes indicam que um aumento da PCR tem sido associado a um risco maior de um futuro ataque cardíaco. Níveis mais altos de fibrinogénio também estão associados a um risco aumentado de um evento cardiovascular futuro, embora o aumento do fibrinogénio não seja um fator de risco tão grande quanto o aumento da PCR. Um aumento de ambas as proteínas de fase aguda indica um processo inflamatório subjacente. Tal processo é associado à aterosclerose, uma patologia que afeta os vasos sanguíneos coronários e outras artérias. A esposa do utente deve incentivá-lo a seguir uma dieta saudável e a perder peso através de exercício..

Outros efeitos da PCR ….. Induz a produqäo de moléculas de adesäo celular, tais como a endotelina-l Localiza-se na intima aterosclerötica Atenua a produqäo de Oxido nitrico Reduz a vasoreactividade endotelial Induz a produqäo de factor tecidular nos monöcitos Medeia a absorqäo de LDL pelos macröfagos Induz a expressäo do inibidor do activador do plasminogénio - I Induz a oxidaqäo do colesterol LDL Induz a activaqäo do complemento Medeia o recrutamento de monöcitos para a parede arterial Rev Port Cardiol..

PCR de alta sensibilidade ( PCR- as ) ou Ultrassensível.

Doseamento da PCR- as. Por determinação da luz transmitida e dispersada.