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Biologia Celular 1º Semestre Ano letivo 2025/2026 Unidade Programática Métodos adotados em Biologia Celular aula teórica 1.

[Audio] "Os objetivos da nossa pesquisa em biologia celular são múltiplos. Em primeiro lugar, buscamos adquirir conhecimento sobre as metodologias atuais e abordagens experimentais amplamente aplicadas no campo da biologia celular. Em segundo lugar, tentamos aprofundar nosso entendimento das métodos utilizados para estudar a organização estrutural e funcional das células. Em terceiro lugar, procuramos identificar o método mais adequado para estudar problemas específicos na biologia celular. Em quarto lugar, priorizamos a perspectiva de aplicação desses métodos em contextos concretos de estudos na biologia celular..

[Audio] " A Biologia Celular é uma disciplina que estuda as células como unidades básicas da vida, desde a estrutura até o funcionamento. Ela busca entender como as células interagem entre si e com seu ambiente, bem como como elas contribuem para os processos biológicos mais amplos. A Biologia Celular também aborda questões relacionadas à saúde humana, como doenças genéticas e imunológicas, além de problemas ambientais..

[Audio] " A biologia celular é um campo de estudo que se concentra na compreensão das estruturas, funções e comportamentos das células. O campo está intimamente relacionado à citologia e fisiologia..

[Audio] " A dimensão (2D) dos objetos microscópicos é medida utilizando instrumentos como o micrómetro ocular e o micrómetro objetivo. O coeficiente micrométrico é o valor em micrómetros de cada divisão da ocular micrométrica para um determinado sistema ocular-objetiva. Para medir a dimensão das células e organelos, os cientistas utilizam técnicas como a observação direta sob o microscópio, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos para calcular a dimensão. " " Os cientistas utilizam técnicas como a observação direta sob o microscópio, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos para calcular a dimensão das células e organelos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos e técnicas de medição de distâncias. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos e a leitura de gráficos de tamanho. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de observação direta. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de medição de distâncias e leitura de gráficos de tamanho. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de medição de distâncias, leitura de gráficos de tamanho e observação direta. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de medição de distâncias, leitura de gráficos de tamanho e observação direta, além de métodos matemáticos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de medição de distâncias, leitura de gráficos de tamanho, observação direta e métodos matemáticos. " " A dimensão das células e organelos é calculada utilizando métodos matemáticos, a medição de distâncias entre objetos, a leitura de gráficos de tamanho e a aplicação de métodos matemáticos, além de técnicas de medição de distâncias, leitura de gráficos de tamanho, observação direta e métodos matemáticos, além de métodos matemáticos. ".

[Audio] " O coeficiente micrométrico (Q) é um valor numérico que representa a relação entre a distância entre as réguas do micrómetro objetivo e a distância entre as imagens de dois objetos diferentes. A distância entre as imagens de dois objetos diferentes pode ser calculada usando o coeficiente micrométrico (Q). Para calcular o coeficiente micrométrico (Q), você precisa seguir alguns passos. Primeiramente, você precisa substituir uma das lentes do microscópio pela lente micrométrica, depois colocar o micrómetro objetivo na platina, escolher uma objetiva e focar a régua do micrómetro objetivo. Em seguida, você precisa rodear a lente micrométrica até as duas réguas se encontrarem paralelas e coincidir, por exemplo, os traços zero. Depois disso, você precisa seguir com os olhos ambas as réguas e encontrar a primeira situação em que ocorre coincidência de traços. Em seguida, você precisa contar o número de divisões (espacos) de ambas as réguas. O coeficiente micrométrico (Q) é usado para calcular a distância entre as imagens de dois objetos diferentes. ".

Antes do cálculo do coeficiente micrométrico..... regras para utilização eficaz do microscópio ótico de fundo claro 1.Verifique se o microscópio está desligado e o reóstato no mínimo; 2. Ligue o cabo elétrico à corrente; 3. Rode o revólver de modo a colocar a objetiva de ampliação 4 x (vermelha) ou de 10 x (amarela) no alinhamento do tubo; 4. Coloque a sua preparação na platina fixando-a com a pinça da sobreplatina móvel; 5. Ligue microscópio, ajuste a intensidade de luz (reóstato, diafragma de campo e diafragma de abertura), de modo a obter melhor brilho e contraste; 6. Ajuste o seu banco de modo a, tendo a coluna direita, ficar com as oculares ao nível dos seus olhos sem que pescoço fique demasiado fletido < 10-15%; 7. Ajuste a distância entre oculares para obter imagem binocular 8. Proceda à focagem: utilize parafuso macrométrico; faça o ajuste fino com o parafuso micrométrico 9. Verique se ambas as oculares estão focadas para o mesmo ponto: • Olhando pela ocular (1) selecione e foque um detalhe da imagem com o parafuso micrométrico; • Uma vez bem focado o detalhe, rode a ocular (2) com anel de dioptria até que o mesmo detalhe esteja também bem focado para essa ocular. 10. Explore a preparação….

[Audio] A citometria de fluxo é uma técnica que utiliza uma radiação laser para excitar substâncias fluorescentes presentes nas células, permitindo a detecção de características celulares como conteúdo de DNA e RNA, atividade enzimática, entre outras. O princípio básico envolve a utilização de um fluxo hidrodinâmico contínuo para proteger as células individuais enquanto elas são interceptadas pelo laser, que emite luz característica após ser excitado. Os parâmetros de dispersão de luz e fluorescência são registrados para obter informações biológicas, moleculares e químicas sobre as células..

Fluorocromo-iodeto de propídio; laser de excitação-488 nm DNA 2C-values (células somáticas); DNA C-values (células gaméticas) Objetivo: estudar o tamanho do genoma (aplicabilidade: relações entre taxa, estudos de biodiversidade e filogenéticos) Unidade de medida de massa-picograma (pg)= 10-12 gramas.

[Audio] The DNA C-value is a measure of the total amount of DNA in an organism's cell. It is calculated by adding up the number of copies of each chromosome that are present in the cell. The DNA C-value can be expressed as a ratio of the total DNA content to the nuclear volume. The ratio is usually expressed as a decimal value between 0 and 1. A higher DNA C-value indicates a greater amount of DNA in the cell. The DNA C-value is also related to the size of the cell and its reproductive capacity. The DNA C-value is not unique to any particular type of cell or tissue. It can be found in both somatic cells and germinal cells. The DNA C-value is a useful tool for studying the genetic material of organisms. It provides information about the amount of DNA in an organism's genome. The DNA C-value has been used to study the evolution of organisms and the development of their genomes. The DNA C-value has also been used to study the relationship between DNA content and the size of the cell..

[Audio] A microscopia óptica utiliza luz branca para iluminar a amostra, o que permite uma visão clara das estruturas celulares. No entanto, essa técnica tem limitações em termos de resolução espacial, pois não pode fornecer imagens detalhadas de objetos muito pequenos..

[Audio] " A técnica de observação de LM-Peridiniopsis é uma técnica de microscopia óptica que utiliza um microscópio de luz branca para visualizar os detalhes estruturais do organismo. A técnica permite a visualização dos detalhes estruturais do organismo, mas não oferece informações sobre a presença de corantes ou pigmentos específicos. Isso significa que, embora possamos ver a estrutura geral do organismo, não podemos identificar com precisidade a presença de corantes ou pigmentos específicos. Por exemplo, se estivermos procurando por corantes específicos, como o corante de Feullen, não poderemos confirmar sua presença apenas com base na observação de LM-Peridiniopsis..

Fixação: etanol 50% ou tetróxido de ósmio aquoso (2%) ou tetróxido de ósmio aquoso (2%) + dicloreto de mercúrio; Filtração: filtro de policarbonato (malha 5 µm); Desidratação: por séries de álcoois seguida de Secagem: por método do ponto crítico. SEM-Peridiniopsis.

Aparelho de Ponto Crítico BAL-TEC CPD 030 Critical Point Dryer Técnica do Ponto Crítico-preparação de material biológico/não biológico para observações em SEM Preserva a estrutura superficial da amostra que poderia, de outra forma, ser danificada devido à tensão superficial durante a mudança de estado líquido para gasoso. A secagem final da amostra no aparelho de ponto crítico, para observação em SEM, é efetuada em condições de total preservação da estrutura superficial da amostra ,evitando a tensão superficial durante a mudança de estado líquido para gasoso, utilizando o dióxido de carbono como agente de troca pelo álcool/acetona. Para cada fluído, existe uma condição de temperatura e pressão característica, em que as fases líquida e gasosa do fluido não podem co-existir; esta combinação corresponde ao ponto crítico do fluido. Para se fazer o ponto crítico, leva-se a amostra já fixada e completamente desidratada, à câmara de CPD (Critical Point Dryer), em um pequeno volume de álcool/acetona. Com a câmara isolada injeta-se o CO2 liquido, e para isso a câmara deve estar à 4- 5ºC, fazendo-se várias substituições até remoção total da acetona. Com o posterior aquecimento controlado da câmara o CO2 torna-se gasoso a uma determinada pressão sem que exista a modificação na estrutura do material biológico. Scanning Eletron Microscopy (SEM) (implica a utilização de feixe de eletrões).

células xilémicas do caule de Olea europaea Tiloses: formações em vasos de xilema sob variadas condições de stresse, durante a invasão de patógenos. São protuberâncias do protoplasto das células parenquimatosas adjacentes e que atravessam as perfurações do xilema. as tiloses têm paredes celulósicas e podem obstruir completamente o vaso xilémico. Em algumas variedades de plantas, as tiloses formam-se abundantemente e rapidamente, enquanto o patógeno ainda está nas raízes jovens, bloqueando o avanço do mesmo. As plantas destas variedades permanecem livres e, portanto, resistentes a este patógeno. Variedades de plantas nas quais poucas ou nenhumas tiloses se formam antes do patógeno se espalhar, são suscetíveis a doenças. Caso de estudo-Projeto Halius (29/03/2021 - 28/03/2024, Financiamento FCT) Rizobactérias halotolerantes para aumento da tolerância de Olea europaea ao stresse salino e à infeção 3b- Observação em SEM da parede celular tilose.

Frustulia vulgaris (alga unicelular) - vista externa da parede celular (frústula) de uma diatomácea (composição-sílica). A fissura no centro da valva é o rafe e permite à diatomácea mover-se quando em contacto com um substrato sólido (bastonetes de mucilagem ligam-se a objetos fora da célula e movem-se ao longo do rafe pela ação de proteínas motoras). 3c- Observação em SEM da parede celular (Bacillariophyceae) NOTA. Que aplicações poderá ter o estudo em SEM da parede celular das diatomáceas?.

LM SEM.

[Audio] " A técnica utilizada aqui é chamada de "peridinização" ou "peridinação", que envolve fixar o citoplasma celular e depois embalar em uma matriz de glutaraldeído e glutaraldeído mais ósmio tetróxido. Esse processo permite uma melhor preservação da estrutura celular e facilita posteriormente a estaining e visualização dos componentes celulares. O incluir blocos de ágar pós-fixados com ósmio tetróxido permite o estudo da ultraestrutura e morfologia celular. O passo de desidratação usando uma série de álcool e propileno oxida ajudam a remover a água do amostra, enquanto a infiltração e incorporação de baixa viscosidade de resina facilitam a criação de seções finas para microscopia eletrônica. Finalmente, cortar as amostras em seções ultra-finas usando uma lâmina afiada de diamante e estaining com uranil acetato e cromato de prata permite a visualização de detalhes celulares no escala nanométrica..

EM UC6 ultramicrotome Leica Microsystems Observações em TEM TEM-Electron Transmission Microscopy (implica a utilização de feixe de eletrões) NOTA: qual a grande diferença entre o tipo de material observado em SEM e TEM? Exemplos da sua aplicação?.

Nota: observação em TEM-preparação do material é idêntica ao referido para organismos unicelulares. 4- Observação/estudo de cloroplastos.

Observação e contagem de cloroplastos (isolados) em câmara de Neubauer 1- Colocar uma gota da suspensão de cloroplastos na câmara de Neubauer, cobrir com a lamela; 2- Observar ao MO; Nota: permite estimar o nº de cloroplastos/ml de amostra NOTA: exemplo de outras observações efetuadas com esta câmara?.

[Audio] " O objetivo principal da câmara de Neubauer é fornecer uma imagem clara e precisa das células sanguíneas. A câmara é projetada para permitir a observação de detalhes finos nos objetos microscópicos. A grelha presente no quadro serve como referência para a leitura das dimensões das células sanguíneas. A câmara pode ser ajustada para diferentes níveis de objetiva, permitindo que os usuários obtenham informações precisas sobre as dimensões das células sanguíneas. Isso é essencial para a identificação correta dos diferentes tipos de células..

[Audio] A técnica da espectrofotometria permite medir o quanto uma substância química absorve de luz, medindo a intensidade dessa luz quando um feixe passa pela solução da amostra. O princípio básico é que cada composto absorve ou transmite luz em um determinado intervalo de comprimento de onda. Essa medição também pode ser usada para medir a quantidade de uma substância química conhecida..

APLICAÇÃO DA TÉCNICA DA ESPETROFOTOMETRIA: Doseamento da clorofila (a, b e clorofila total) Procedimento: 1-Obtenção da suspensão dos cloroplastos isolados (sol. de sacarose), juntar acetona e centrifugar 2- Leitura da absorvância (λ 645 nm; 663 nm) do sobrenadante em espetrofotómetro Cálculo da concentração de clorofilas a, b, total (em µg/ml), aplicando as seguintes equações (1): Ccla= 12,70*A663- 2,69*A645 Cclb= 22,90*A645- 4,68*A663 CT=20,21*A645+ 8,02*A663 A663 = absorvãncia da clorofila submetida a um feixe de luz com λ 663 nm. (1) O método inicialmente desenvolvido, e ainda hoje frequentemente utilizado, é o método de Arnon (1949) NOTA: importância do doseamento da clorofila (µg/ml)?.